ОПЫТ ПОЛУЧЕНИЯ АЛЛЕРГЕНОВ ИЗ СИНАНТРОПНЫХ ВИДОВ ТАРАКАНОВ И ОЦЕНКА ИХ РОЛИ В РАЗВИТИИ АТОПИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ Бабенко С.А., Земляная Н.А., Березная Т.В., Погребенкова В.В. Сибирский государственный медицинский университет, Томск
Синантропные виды тараканов широко распространены в окружающей человека среде, являясь не только показателем санитарного неблагополучия жилья и переносчика-ми возбудителей инфекций, но и потенциальными продуцентами достаточно сильных ал-лергенов [2,5]. Известно более 3,5 тысяч видов этих насекомых, особо опасными для че-ловека являются 8 – 10 видов [5]. Приспособленные к различным условиям существова-ния, всеядные, неприхотливые к условиям обитания, способные адаптироваться к химиче-ским нагрузкам эти существа ведут постоянную борьбу с человеком за свое выживание. Высокой аллергенной активностью обладают не только частицы тел тараканов, и продук-ты их жизнедеятельности, в структуре которых в последнее время много внимания уделя-ется грегаринам (Gregarina blattarum) и нематодам [4,5]. Исходя из этого места обитания тараканов остаются потенциально аллергенными и после полной эллиминации насекомых. Гиперчувствительность к тараканам распространена во многих странах мира, в частности от 25 до 70 % больных бронхиальной астмой в Европе, США и Азии являются сенсибили-зированными к аллергенам тараканов [2]. В России и на территории nомской области наи-более распространены тараканы видов Blattella germanica, Blatta orientalis и Periplaneta americana. Перекрестная реактивность среди этой группы составляет по литературным данным от 40 до 60 %, причем перекрестная аллергия между некоторыми белками B.germanica и P.americana достигает 70 – 100% [3]. Природа тараканьих аллергенов актив-но изучается в настоящее время, среди каждого вида выделено по несколько белков, обла-дающих аллергенной активностью (Bla g 1 – 5, Per a 1, 2). В тоже время достаточно адек-ватным и показательным по сей день остается экстракт всего тела таракана – whole body extract (WBE) [3 – 5]. Несмотря на актуальность проблемы, промышленное производство аллергенов из тараканов в России не налажено, тем не менее в последнее время появились публикации об изготовлении опытных серий аллергенов из тараканов B. germanica [2], сравнительная же характеристика трех наиболее распространенных видов тараканов в отечественной ли-тературе нами не была найдена. Цель данной работы – изготовить серии аллергенов (WBE) из тараканов В.germanica, B.orientalis, P.americana и сравнить их значимость в раз-витии атопических заболеваний. В работе использовали культуру тараканов P.americana, выращенную в инсектарии НИИ биологии и биофизики, культура тараканов B.orientalis частично была выращена в инсектарии, частично собрана в ловушки в частных домах г.Томска. Тараканы B.germanica все были собраны в ловушки в общежитиях СГМУ и ТГУ. Тараканов убивали замораживанием до –25оС, обезжиривали и гомогенезировали. Гомогенат экстрагировали путем криодеструкции при попеременном замораживании (-25о) и оттаивании в 0,125 М боратном буфере рН 8,00,2 с последующей предфильтрацией через бумажные фильтры и стерилизующей фильтрацией через фильтры «Millipore» [2]. Во всех сериях определяли содержание белка микробиуретовым методом. Аллергенные свойства препаратов оцени-вались методом непрямой дегрануляции тучных клеток (ТДТК) перитонеальной полости мышей с сывороткой больных аллергическими заболеваниями. В условиях иммуно-аллергологического отделения МВБ г. Томска обследованы 30 пациентов с различными формами аллергии (атопическая бронхиальная астма, аллергиче-ский ринит, атопический дерматит, рецидивирующая крапивница). Диагноз устанавливал-ся на основании общепринятых критериев [1]. Большинство больных имело в анамнезе специфическую иммунотерапию (СИТ) с аллергенами домашней пыли с хорошим и удовлетворительным результатом. Статистическую обработку результатов проводили с помощью пакета приложений MS Excel 7.0 for Windows. Было получено по одной серии водно-солевых экстрактов из каждого вида тарака-нов. Аллергены представляли собой прозрачную опалесцирующую жидкость светло-желтого цвета. Общее cодержание белка в экстрактах, а также процент дегрануляции туч-ных клеток перитонеальной полости мышей с сывороткой больных представлен в табли-це: Экстракт аллергена Cодержание белка микро-биуретовым методом, мг/мл Процент дегрануляции туч-ных клеток (Mm) Blattella germanica 0,96 37,43,6% Blatta orientalis 0,92 50,43,9% Periplaneta americana 0,88 38,81,1% Тест дегрануляции тучных клеток в общей группе больных со всеми аллергенами оказался положительным, следовательно можно предполагать значительную роль аллер-генов тараканов в развитии гиперчувствительности к домашней пыли. Несмотря на при-мерно одинаковое содержание общего белка во всех сериях аллергенов, процент деграну-ляции тучных клеток в случае с B.orientalis (черный таракан) оказался значительно выше (50,43,9%) чем с P.americana (американский таракан) и B.germanica (прусак), в которых процент оказался схожим и составил соответственно 38,81,1% и 37,43,6%. Данная особенность может быть обусловлена как физическими свойствами самого таракана (лучшая гомогенизация и экстракция) так и составом и физико-химическими свойствами входящих в него белков (возможно кишечный тракт черного таракана более населен паразитами, определяющими аллергенные свойства экстракта), а также индивидуальной сенсибилизацией именно к этим белкам. Наиболее оптимальным и часто используемым методом получения аллергенов из та-раканов в мире является экстракция в растворе бикарбоната аммония, фосфатном или бо-ратном буфере [2], проведенная нами работа является подтверждением этому. В томской области пациенты, сенсибилизированные к домашней пыли в подавляющем большинстве случаев оказались чувствительными и к аллергенам синантропных тараканов. Причем наибольший процент сенсибилизации по данным ТДТК был выявлен к аллергену черного таракана (B.orientalis). Известно, что недостаточный эффект от СИТ зачастую связан с не-достаточным набором лечебных аллергенов [1]. Возможно что в данном случае отличный эффект СИТ у больных отсутствует по причине неиспользования в структуре терапии ал-лергенов тараканов. По итогам проведенного исследования представляется возможным рекомендовать наладить серийное производство различных видов тараканьих аллергенов, в т.ч. и на тер-ритории томской области, а подразделениям аллергологической службы – активно их ис-пользовать для диагностики и терапии аллергических заболеваний. Литература 1. Клиническая иммунология и аллергология. Под ред. Г.Лолора-младшего, Т.Фишера и Д.Адельмана. Пер. с англ. – М., Практика, 2000. – 806 с. 2. С.Н.Жирова, В.Б.Гервазиева. Аллерген из тараканов Blattella germanica и его им-мунологические свойства. Журн. микробиол., 2000, №3, с. 66 – 69. 3. L.Yman, I.Holmquist, R.Paganelli. Cockroach-specific IgE antibodies in allergy. Rev fr. Allergol. 1998; 38(10): 851 – 858 4. Melen E, Pomes A,Vailes L.D., Arruda L.K., Chapman M.D. Molecular cloning of Per a 1 and definition the cross-reactive Group 1 cockroach allergen.J. Allergy Clin. Im-munol. 1999, 103(51): 859 - 864 5. Rosenstreich DL, Eggleston P, Kattan M, Baker D, Slavin RG, Gergen P, Mitchell H, McNiff-Mortimer K, Lynn H, Ownby D, Malveaux F. The role of cockroach allergy and exposure to cockroach allergen in causing morbidity among inner-city children with asthma. New Eng J Med 336:1356-1363, 1997.
|